本发明提供了一种无需PCR仪的侧翼核酸序列快速准确扩增方法，包括如下步骤： 1）第一轮反应：以DNA模板、重组酶聚合酶、第一轮引物进行第一轮反应； 2）第二轮反应：以第一轮反应产物为模板，加入重组酶聚合酶、第二轮引物，进行第二轮反应； 3）第三轮反应：以第二轮反应产物为模板，加入重组酶聚合酶、第三轮引物进行第三轮反应。 本发明还提供了用于无需PCR仪的侧翼核酸序列快速准确扩增方法的引物和试剂盒。本发明的另一目的是提供所述方法、引物、试剂盒在DNA序列扩增中的应用。本发明的方法不用PCR仪，能简单、高效、准确扩增DNA侧翼序列。

研发单位：北京市农林科学院林果所

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