初春采平邑甜茶一年生枝条，水培养10天左右，取枝条上饱满的芽，流水冲洗3小时，用0.1%的升汞（HgCl2）处理6分钟，无菌水冲洗6次，用无菌吸水纸吸干残留水分，将芽接种到初代培养基上。该初代培养基为在MS基本培养基中附加30g·L-1蔗糖、6.5g·L-1琼脂粉、1.0mg·L-16-苄基腺嘌呤和0.2mg·L-1吲哚丁酸，pH5.6的培养基。在接种后的第二天开始有部分材料开始褐化，一旦发现有褐化的材料，马上换新的培养基，直到褐化消除。接种10天时，饱满的芽都开始萌发，40天时长成约4cm左右的组培苗，以后每月继代一次。平邑甜茶组培苗的继代培养基为：在MS基本培养基中附加30g·L-1蔗糖、6.5g·L-1琼脂粉、0.3mg·L-16-苄基腺嘌呤和0.1mg·L-1萘乙酸（naphthalene-aceticacid），pH5.6的培养基。将平邑甜茶的组培苗在该继代培养基上培养生长35天，即可切取叶盘进行不定芽再生的步骤。在超净工作台上取组培苗的伸展叶片，用剪刀剪成约0.1cm2的叶盘，接种在再生培养基上。所述再生培养基为在MS基本培养基中附加30g·L-1蔗糖、6.5g·L-1琼脂粉、2.0mg·L-1N-苯基-N’-1,2,3-噻二唑-5-脲（1,2,3-thiadiazol-5-yl-N-phenylurea）和0.2mg·L-1吲哚丁酸，pH5.6的培养基。将叶盘接种后，先在温度（25±1）℃的条件下暗培养14天，然后置于光周期为16小时光照/8小时黑暗、光照强度为30μmol·m-2·s-1的条件下再培养约30天，即可再生出不定芽,再生频率最高达100%。

研发单位：北京市农林科学院林果所

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